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Technologie taqman®

La technologie TaqMan® utilise une sonde fluorogénique qui permet de détecter les produits de PCR spécifiques à mesure qu'ils s'accumulent durant les cycles de PCR.

Les étapes de la procédure
  • Une sonde d'oligonucléotides est construite contenant un marqueur fluorescent à son extrémité 5' et un atténuateur (quencher) à sont extrémité 3'. Lorsqu'il est intact, l'atténuateur, par sa proximité, diminue de beaucoup l'émission de la fluorescence du marqueur par transfert d'énergie (résonance de type Förster).
  • Si la séquence spécifique recherchée est présente, la sonde va s'apparier en aval d'un des sites des amorces et elle sera clivée par l'activité nucléasique de la polymérase Taq à mesure que l'amorce est allongée.
  • Le clivage de la sonde a) sépare le marqueur fluorescent de l'atténuateur, augmentant ainsi la fluorescence du marqueur et b) déloge la sonde de la séquence spécifique permettant l'extension de l'amorce jusqu'à la fin du brin matrice. Ainsi l'inclusion de la sonde n'inhibe pas le processus de PCR dans son ensemble.
  • D'autres molécules fluorescentes sont aussi clivées de leur sonde respective à chaque cycle, résultant en une augmentation de l'intensité de la fluorescence proportionnellement à la quantité d'amplicons produits.

Pour plus d'informations, visitez le site Internet d'Applied Biosystems.